جداسازی و شناسایی باکتریهای مهارکننده رشد و تولید آفلاتوکسین درآسپرژیلوس پارازیتیکوس ازنمونه خاک مزارع پسته , ذرت

کد محصول DM85

105 صفحه فایلWORD

تعداد صفحات: 18000 تومان

فهرست مطالب

فصل اول – کلیات
1-1. مقدمه 1
1-2. مروری بر مایکوتوکسین ها 3
1-3. قارچ های مولد مایکوتوکسین 3
1-4. آفلاتوکسین ها 3
1-4-1.مقدمه .3
1-4-2.قارچ های مولد و شرایط تولید .4
1-4-2-1. مورفولوژی و صفات بیولوژیک آسپرژیلوس فلاووس و آسپرژیلوس پارازیتیکوس  4
1-4-3. ساختمان شیمیایی آفلاتوکسین .7
1-4-4. خواص فیزیکی وشیمیایی آفلاتوکسین 7
1-4-5. مسیر بیوسنتز و ژن های دخیل در بیوسنتز آفلاتوکسین 8
1-5. روش های آنالیز و سنجش آفلاتوکسین 10
1-5-1. روش کروماتوگرافی لایه نازک .10
1-5-2. روش کروماتوگرافی مایع با کارایی 11
1-5-3. روش الایزا 11
1-6. کنترل زیستی  قارچ های  آسپرژیلوس فلاووس و آسپرژیلوس پارازیتیکوس 11
1-6-1. مقدمه .11
1-6-2. روشهای عملی مورد استفاده در کنترل زیستی میکروبی .13
1-6-3. مکانیسم های کنترل زیستی 14
1-6-4. کنترل زیستی قارچ تولید کننده آفلاتوکسین. .19
1-6-5. روشهای غربالگری باکتری های دارای فعالیت مهاری بر رشد آسپرژیلوس 22
1-6-6. روشهای تشخیص ملکولی باکتری های مهاری 25
1-7. متابولیتهای باکتریایی .26
1-7-1. فاکتورهای موثر در تولید متابولیتهای باکتریایی 26
1-7-2. مکانیسم اثر متابولیتهای باکتریایی بر روی رشد آسپرژیلوس و تولید آفلاتوکسین 27

فصل دوم –  مروری بر مطالعات انجام شده 32

فصل سوم –  مواد و روشها. 35
3-1. فهرست مواد شیمیایی و محیط های کشت 35
3-1-1. محیط های کشت .35
3-1-2. مواد شیمیایی 35
3-2. جمع آوری نمونه های خاک 36
3-2-1. مناطق جغرافیایی .36
3-2-2. روش نمونه برداری خاک .36
3-3. کشت اولیه نمونه های خاک برای جداسازی باکتری ها .37
3-3-1. مواد و وسایل مورد نیاز 37
3-3-2 محیط های کشت مورد نیاز .37
3-3-2-1. محیط عصاره مخمر-گلوکز آگار 37
3-3-2-2. محیط کینگ B. .38
3-3-2-3. محیط سابورو دکستروز آگار .39
3-3-2-4. محیط سیب زمینی- دکستروز آگار 39
3-3-3. روش کار 40
3-3-3-1. نمونه خاک .40
3-4. بررسی اولیه فعالیت مهاری باکتری ها بر روی آسپرژیلوس پارازیتیکوس 2999 40
3-4-1. تهیه سوسپانسیون اسپور از قارچ آسپرژیلوس پارازیتیکوس 40
3-4-2. محیط سیب زمینی- دکستروز آگار .41
3-5. تایید فعالیت مهاری باکتری ها بر روی آسپرژیلوس پارازیتیکوس NRRL 2999  41
3-5-1. تهیه سوپ حاوی متابولیت مهار کننده رشد و تولید آفلاتوکسین از محیط کشت باکتری 41
3-5-2. سنجش کیفی فعالیت مهاری باکتری ها بر روی آسپرژیلوس پارازیتیکوس NRRL 2999  نورموتانت در محیط سیب زمینی دکستروز آگار در پلیتهای شش خانه 42
3-5-3. سنجش کمی فعالیت مهاری باکتری ها بر روی آسپرژیلوس پارازیتیکوس NRRL 2999  در محیط سیب زمینی دکستروز براث در ارلن 43
3-5-3-1. تعیین وزن خشک قارچ. .43
3-5-3-2. آنالیز کیفی آفلاتوکسین B1  با استفاده از کروماتوکرافی لایه نازک ..44
3-5-3-3. آنالیز کمی آفلاتوکسین B1  با استفاده از کروماتوکرافی مایع با کارایی بالا .44
3-6. شناسایی ملکولی باکتریهای مهار کننده رشد و تولید آفلاتوکسین در آسپرژیلوس پارازیتیکوس براساس الگوی    16s rRNA 45
3-6-1. شناسایی باکتریهایی گرم مثبت و گرم منفی .45
3-6-2. استخراج DNA .45
3-6-3. استخراج DNA باکتریهای گرم مثبت و گرم منفی .46
3-6-3-1. استخراج DNA باکتریهای گرم مثبت .46
3-6-3-2. استخراج DNA باکتریها گرم منفی .48
3-6-4. الکتروفورز .49
3-6-4-1. طرز تهیه ژل آگارز 1%: .50
3-6-4-2. طرز تهیه DNA Loading Buffer     51
3-6-4-3. روش انجام الکتروفورز .51
3-6-5.  طراحی پرایمر یونیورسال .52
3-6-5-1.توالی پرایمر های استفاده شده .55
3-6-6. فرایند PCR .55
1-6-6-3بهینه‌سازی PCR .59
3-6-7. تعیین توالی نوکلئوتیدی 16s rRNA تکثیر شده 60

فصل چهارم – نتایج 63
4-1. جداسازی باکتری ها از نمونه های خاک مزارع   .63
4-2. جداسازی و غربالگری باکتری های مهارکننده رشد و تولید آفلاتوکسین    64
4-3. شناسایی باکتری های مهارکننده رشد و تولید آفلاتوکسین .74

فصل پنجم – بحث .82
منابع و ماٌخذ 88