پارس پروژه پرتال خدمات دانشگاهی
کد محصول PZ29
تعداد صفحات: 96 صفحه فایل WORD
قیمت: 20000 تومان
فهرست مطالب
1.فصل اول(مقدمه و مروری بر مطالعات گذشته) 1
1.1 مقدمه 2
2.1 ویروس هپاتیتC(HCV) 3
3.1 سیر ایجاد ژنوتیپ 4
4.1 ژنوم و پروتئوم ویروس HCV 6
5.1 ساختار RNA داخلی و عناصر همانندسازی Cis-acting 9
6.1 چرخه تکثیر ویروس 10
7.1 مکانیسم آسیب کبدی با واسطه ایمنی 12
8.1 تظاهرات بالینی بیماری هپاتیت C 13
1.8.1 هپاتیت C حاد 14
2.8.1 هپاتیت مزمن 15
3.8.1 فیبروز 15
4.8.1 سیروز 15
5.8.1 سرطان سلولهای کبدی (HCC) 16
9.1 تظاهرات خارج کبدی 16
10.1 تشخیص 17
11.1 پیشگیری 17
12.1 درمان 18
1.12.1 درمان با اینترفرون آلفا 18
2.12.1 اینترفرون با اثر طولانی 18
3.12.1 درمان توأم 19
13.1 اپیدمیولوژی 20
14.1 پروتئین NS3 ویروس هپاتیتC 21
2. فصل دوم(مواد و روشها) 23
1.2 اهداف 24
1.1.2 هدف کلی 24
2.1.2 اهداف جزئی 24
2.2 استخراج ژنوم HCV از پلاسمای بیمار آلوده به HCV با ساب تایپ 1a 24
3.2 بررسی RNA استخراج شده به وسیله خواندن میزان OD با استفاده از دستگاه اسپکتروفتومتر 25
4.2 انجام RT-PCR و تولید cDNA ژنوم HCV 26
5.2 تکثیر ناحیه ژن NS3 helicase ویروس هپاتیت C با استفاده از روش PCR داخلی(Nested PCR) 28
6.2 خالص سازی محصول PCR 33
7.2 لایگیشن محصول PCR و وکتور بیانی pET102/D.TOPO 33
8.2 باکتری های مورد استفاده در تحقیق 37
1.8.2 سویه DH5α 37
2.8.2 سویه BL21(DE3) 37
9.2 تهیه باکتری های مستعد و انجام ترانسفورمیشن 38
1.9.2 روش ایجاد باکتری های مستعد 39
2.9.2 روش انجام ترانسفورمیشن 40
10.2 استخراج پلاسمید 41
11.2 بیان پروتئین NS3 helicase 43
12.2 استخراج و تخلیص پروتئین نوترکیب از باکتری با استفاده از ستون نیکل 43
1.12.2 استخراج پروتئین از باکتری 43
2.12.2 تخلیص پروتئین نوترکیب 44
13.2 سنجش غلظت پروتئین ها 45
14.2 الکتروفورز پروتئین ها در ژل پلی آکریلامید در حضور سدیم دودسیل سولفات(SDS-PAGE) 46
15.2 رنگ آمیزی ژل پلی آکریلامید با کوماسی بلو R-250 49
16.2 تست وسترن بلاتینگ 49
17.2 تست الیزا 51
1.17.2 انواع روش های الیزا 51
2.17.2 بهینه کردن شرایط آزمایش 52
3.17.2 مراحل تست الیزا 53
3.فصل سوم (نتایج و یافته ها) 55
1.3 استخراج RNA ویروس و سنتز Cdna 56
2.3 تکثیر ژن NS3 helicase با روش Nested- PCR 56
3.3 نتایج لایگیشن و ترانسفورم وکتور بیانی pET102/D.TOPO 57
به داخل باکتری و تکثیر و تلخیص آن 58
4.3 نتایج حاصل از استخراج پلاسمید 59
5.3 نتایج حاصل از انجام Sequencing قطعه ژن NS3 helicase 59
6.3 ترانسفورم پلاسمید استخراج شده به میزبان بیانی (BL21) 60
7.3 القای باکتری،استخراج و تلخیص پروتئین نوترکیب NS3 helicase 60
8.3 الکتروفورز محلول های پروتئینی جدا سازی شده بر روی ژل SDS-PAGE 61
9.3 روش وسترن بلاتینگ 62
10.3 تست الیزا 64
4. فصل چهارم(بحث، نتیجه گیری و پیشنهادها) 65
1.4 بحث 66
2.4 استفاده از Directional TOPO Cloning برای بیان مستقیم ژن NS3 helicase 67
3.4 بیان و خالص سازی پروتئین نوترکیب NS3 helicase 68
4.4 روش وسترن بلاتینگ 69
5.4 تست الیزا 69
6.4 نتیجه گیری 69
7.4 پیشنهادها 70
فهرست منابع 71
چکیده انگلیسی 76